Экспериментальная частьСтраница 2
Соединение фрагментов с вектором
Предлагаемый метод пригоден для лигирования частичных гидролизатов Sau3Al в вектор Lorist2.
1. Добавьте вместе 1 мкл BamHI-обработанного де-фосфорилированного Lorist2; 2 мкл приготовленных 5аиЗА1-фрагментов; 2 мкл 10 X лигазного буферного раствора; 2 мкл 10 мМ АТР, рН 7,4; 2 мкл 0,1 М дитиотрей-тола; 10 мкл воды и 1 мкл лигазы. Для достижения максимально возможного лигирования поместите смесь в закрытый капилляр. Описание дизайн интерьеров дизайн квартир у нас на сайте.
2. Инкубируйте 16 ч при 14°С.
3. Осторожно упакуйте, руководствуясь соответствующей методикой.
4. Храните библиотеку при 4°С под хлороформом.
5. Разведите 5 мкл упакованной библиотеки в 0,1 мл раствора для разведения.
Добавьте 0,2 мл стационарной культуры клеток. Мы используем для этих целей линию 1046. Ее следует регулярно пересевать через отдельные колонии, контролируя признак reck.
Инкубируйте 20 мин при 37°С. Добавьте 0,5 мл раствора CY и проинкубируйте дополнительно 50 мин. Высейте разные объемы на чашки с канамицином. Ожидаемый выход – 105–106 рекомбинантов на 1 мкг вставочной ДНК.
Другие статьи:
Меры борьбы с вредителями и болезнями
В средней полосе России специфические вредители и болезни облепихи встречаются довольно редко и не причиняют существенного вреда. Из вредителей наиболее опасны грызуны, тля, облепиховая выемчатокрылая моль, из болезней – эндомикоз и фузар ...
Мышцы и фасции шеи
Мышцы шеи разделяются на поверхностные и глубокие. В отдельную группу выделяются мышцы, прикрепляющиеся к подъязычной кости,— над подъязычные и под - подъязычные мышцы.
К поверхностным мышцам шеи относятся подкожная мышца шеи и грудино - ...
Карпообразные. Харациновые.
К подотряду харациновых (Characoidei) относятся рыбы, длина которых от 2,5 см до 1,5 м. В отличие от карповых имеют жировой плавник, челюстные зубы (глоточных зубов нет). Многие ярко окрашены. Водятся в пресных водах тропической Африки, ...